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恒溫消解儀在蛋白質(zhì)測定中的有效應用
點擊次數(shù)：2355 更新時間：2014-12-16 返回
凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)的含量，是zui常用的蛋白質(zhì)測定方法，但樣品的消解費事費時，一般一臺電爐一天zui多消化兩個樣品。這里，我們采用恒溫消解儀進行蛋白質(zhì)消解，4~6小時可同時消化16個樣品。有效的提高了樣品消解的速度。
下面具體來看恒溫消解儀進行蛋白質(zhì)消解的過程：
A.稱0.2-2.0g固體樣品或5-10g液體樣品于平底玻璃消化管中，加0.2g硫酸銅，3g硫酸鉀及20ml硫酸，稍搖勻后于管口放一小漏斗，置于恒溫消解儀中，300℃左右，小心加熱，一般2h內(nèi)，管內(nèi)容物可全部炭化，泡沫*停止。
B.將溫度降至240℃左右，分幾次向管內(nèi)共加10ml過氧化氫，提高溫度至390℃左右，繼續(xù)消化，至液體呈藍綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱30min，放冷后，定容100ml，混勻備用。
C.取與處理樣品相同的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸、過氧化氫按同一方法做試劑空白實驗。
本方法全部消化過程約需4-6h，一次zui多可消化16個樣品。同時使用普通電爐進行蛋白質(zhì)消解，進行比較實驗。
定氮測定：按國家標準[1]中GB5009.5-85食品中蛋白質(zhì)的測定方法(4.3)微量定氮法進行操作。
結(jié)果及討論
樣品的用量：根據(jù)不同的蛋白質(zhì)含量，取0.2g-2.0g樣品，置消化管內(nèi)進行消解，在300℃初始消解無外溢現(xiàn)象。樣品先加酸放置過夜，可加快消解速度。
開始消解時，由于消解溫度恒定，消解管整體受熱均勻，一般泡沫不能溢出管外，較直接電爐消解容易控制。
消解溫度：初始消解時溫度不可過低，過低造成消化時間延長。實驗證明初始消解溫度300℃為宜。只要消解管內(nèi)無泡沫產(chǎn)生，應及時把溫度提高到390℃左右，以加快消解速度。
恒溫消解儀在蛋白質(zhì)測定中，有效提高了樣品消解的速度，進而也提高了蛋白質(zhì)測定的速度。
